成年爪蟾（Xenopus）安乐死操作规范

1. 目的

确保在实验终止或组织取样前，对成年非洲爪蟾进行人道、不可逆、无痛苦的安乐死，符合动物福利与伦理要求。

2. 适用范围

适用于在实验中使用成年非洲爪蟾（Xenopus laevis 或 Xenopus tropicalis）的所有科研人员和实验操作员。

3. 原则要求

安乐死必须达到以下标准：

• 心跳完全停止

• 无自主呼吸或反射

• 不可逆性脑死亡

• 避免动物痛苦

4. 安乐死方法与剂量

可选择以下任一方法，操作中应严格控制剂量与暴露时间：

4.1 三卡因甲烷磺酸盐（MS-222）浸泡法

• 溶液浓度：5 g/L（以甲烷磺酸三卡因计）

• 曝露方式：将动物完全浸没于药液中

• 曝露时间：不少于60分钟

• pH调整：使用缓冲液调节至pH 7.0–7.5，避免酸性引起刺激

4.2 腹腔注射安乐死药物混合液

• 戊巴比妥钠（Pentobarbital sodium）：1100 mg/kg

• 苯妥英钠（Phenytoin sodium）：标准配比与戊巴比妥钠联用

• 注射部位：体腔内（intracoelomic injection）

• 应使用一次性无菌注射器操作，确保剂量准确

4.3 腹侧皮下注射苯佐卡因（Benzocaine）

• 剂量：182 mg/kg

• 稀释液：以乙醇或生理盐水为溶剂制备可注射剂型

• 注射部位：腹侧皮下（subcutaneous, ventral）

• 注意避免注射入脏器或肌肉

5. 确认死亡标准

在任何安乐死方法实施后，必须确认以下至少两项生理终止指标，确保不可逆死亡：

• 无心跳（心脏听诊或显微观察）

• 无反射（对痛刺激无任何反应，如足蹼夹刺激）

• 无呼吸动作（长时间观察不见咽喉运动）

• 无自主活动或肌肉张力

如必要，可执行双重安乐死法（如注射法后再行破坏脑干）作为强化手段。

6. 注意事项

• 所有操作人员应接受动物使用伦理培训

• 应在通风良好、操作安静的环境中进行

• 药物处理、遗体处置应符合实验室生物安全与化学废弃物管理规定

7. 附注

MS-222 为美国国家研究委员会（NRC）推荐的爬两栖类麻醉剂。戊巴比妥-苯妥英混合注射液为常见商业安乐死剂，符合AVMA（2020）安乐死指南。