电生理实验溶液配制
2019-03-05 11:30:41
一、内液（Internal Saline）配方
| 成分名称 | 化学式/缩写 | 分子量 (g/mol) | 每10 mL用量 (mg) | 终浓度 (mM) |
|---|---|---|---|---|
| 甲磺酸铯 | CsCH₃SO₃ | 228.0 | 182.40 | 90 |
| 氯化镁 | MgCl₂ | 203.3 | 10.17 | 5 |
| 四乙基氯化铵 | TEA-Cl | 165.7 | 33.14 | 20 |
| EGTA螯合剂 | C₁₄H₂₄N₂O₁₀ | 380.4 | 38.04 | 10 |
| HEPES缓冲剂 | C₈H₁₈N₂O₄S | 238.3 | 47.66 | 20 |
| 三磷酸腺苷（钠盐） | ATP-Na₂ | 551.1 | 11.00 | 2 |
| 鸟苷三磷酸（钠盐） | GTP-Na₂ | 523.2 | 1.57 | 0.3 |
配制流程
初始溶解：取8 mL超纯水（18.2 MΩ·cm），依次溶解上述成分，磁力搅拌至完全溶解。
pH调节：使用甲磺酸铯（CsOH）将溶液pH精确调整至7.2±0.05（25℃）。
渗透压校准：加入超纯水定容至10 mL，确保溶液渗透压为250±2 mOsm/kg（冰点渗透压计验证）。
分装存储：分装至500 μL无菌冻存管，-80℃避光保存，有效期30天。
二、外液（External Saline）配方
| 成分名称 | 化学式/缩写 | 分子量 (g/mol) | 每1 L用量 (mg) | 终浓度 (mM) |
|---|---|---|---|---|
| 氯化钠 | NaCl | 58.44 | 6720.6 | 115 |
| 氯化钾 | KCl | 74.55 | 298.2 | 4 |
| 二水氯化钙 | CaCl₂·2H₂O | 147.00 | 441.0 | 3 |
| 六水氯化镁 | MgCl₂·6H₂O | 203.30 | 610.0 | 3 |
| HEPES缓冲剂 | C₈H₁₈N₂O₄S | 238.30 | 1191.5 | 5 |
| 甘氨酸 | C₂H₅NO₂ | 75.10 | 0.76 | 0.01* |
| 葡萄糖 | C₆H₁₂O₆ | 180.20 | 1802.0 | 10 |
| 印防己毒素 | C₃₀H₃₄O₁₃ | 602.6 | 240.8** | 100*** |
配制流程
基础溶液制备：取800 mL超纯水，依次溶解NaCl、KCl、CaCl₂·2H₂O、MgCl₂·6H₂O、HEPES、甘氨酸及葡萄糖，搅拌至完全溶解。
pH调节：使用NaOH（5 M）将溶液pH调整至7.2±0.05（25℃）。
渗透压校准：定容至1 L，确保渗透压为250-255 mOsm/kg。
印防己毒素添加：
母液配制：取240.8 mg印防己毒素溶于4 mL超纯水，配制成100 mM母液。
使用前添加：按实验需求加入终浓度100 μM（1:1000稀释）。
分装存储：基础溶液4℃保存≤7天；印防己毒素母液分装100 μL/管，-20℃避光保存（有效期6个月）。
三、关键质量控制参数
| 检测项目 | 内液标准 | 外液标准 | 检测方法 |
|---|---|---|---|
| pH值（25℃） | 7.15-7.25 | 7.15-7.25 | 精密pH计（三点校准） |
| 渗透压（mOsm/kg） | 250±2 | 250-255 | 冰点渗透压计 |
| 无菌性 | 无微生物生长 | 无微生物生长 | 37℃培养48小时 |
| 离子浓度偏差 | ≤±2% | ≤±3% | 原子吸收光谱法 |
四、操作注意事项
内液使用：解冻后需涡旋混匀，避免反复冻融（≤3次）。
外液稳定性：添加印防己毒素后需4小时内使用，防止光解失效。
毒性物质防护：操作印防己毒素时需佩戴N95口罩及丁腈手套。
注释
**印防己毒素母液用量：240.8 mg/4 mL = 100 mM（分子量602.6）。
***印防己毒素终浓度根据实验需求调整，常规电生理实验使用100 μM。