1. 目的
确保在实验终止或组织取样前，对成年非洲爪蟾进行人道、不可逆、无痛苦的安乐死，符合动物福利与伦理要求。
2. 适用范围
适用于在实验中使用成年非洲爪蟾（Xenopus laevis 或 Xenopus tropicalis）的所有科研人员和实验操作员。
3. 原则要求
安乐死必须达到以下标准：心跳完全停止、无自主呼吸或反射、不可逆性脑死亡、避免动物痛苦。
4. 安乐死方法与剂量
4.1 三卡因甲烷磺酸盐（MS-222）浸泡法
- 溶液浓度：5 g/L（以甲烷磺酸三卡因计）
- 曝露方式：将动物完全浸没于药液中
- 曝露时间：不少于60分钟
- pH调整：使用缓冲液调节至pH 7.0–7.5，避免酸性引起刺激
4.2 腹腔注射安乐死药物混合液
- 戊巴比妥钠（Pentobarbital sodium）：1100 mg/kg
- 苯妥英钠（Phenytoin sodium）：标准配比与戊巴比妥钠联用
- 注射部位：体腔内（intracoelomic injection）
- 应使用一次性无菌注射器操作，确保剂量准确
4.3 腹侧皮下注射苯佐卡因（Benzocaine）
- 剂量：182 mg/kg
- 稀释液：以乙醇或生理盐水为溶剂制备可注射剂型
- 注射部位：腹侧皮下（subcutaneous, ventral）
- 注意避免注射入脏器或肌肉
5. 确认死亡标准
在任何安乐死方法实施后，必须确认以下至少两项生理终止指标，确保不可逆死亡：
- 无心跳（心脏听诊或显微观察）
- 无反射（对痛刺激无任何反应，如足蹼夹刺激）
- 无呼吸动作（长时间观察不见咽喉运动）
- 无自主活动或肌肉张力
如必要，可执行双重安乐死法（如注射法后再行破坏脑干）作为强化手段。
6. 注意事项
- 所有操作人员应接受动物使用伦理培训
- 应在通风良好、操作安静的环境中进行
- 药物处理、遗体处置应符合实验室生物安全与化学废弃物管理规定
MS-222 为美国国家研究委员会（NRC）推荐的爬两栖类麻醉剂。戊巴比妥-苯妥英混合注射液为常见商业安乐死剂，符合AVMA（2020）安乐死指南。
参考文献References
- AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals (2020). American Veterinary Medical Association, Schaumburg, IL.
- Reed BT (2005) Guidance on the housing and care of the African clawed frog Xenopus laevis. RSPCA Research Animals Dept., Horsham, UK.
- Green SL (2010) The Laboratory Xenopus sp. CRC Press, Boca Raton.