1. 目的
规范非洲爪蟾（Xenopus laevis）蝌蚪人工繁育的全流程操作，从配子采集、受精孵化到蝌蚪阶段饲养，确保高受精率与孵化率。
2. 配子准备
2.1 卵母细胞采集与保存
- hCG 注射后 8–10 h，用宽口吸管将产出的卵块轻柔收集至培养皿（1× MBS-H）。
- 卵母细胞于 0.1× MMR（含庆大霉素 50 μg/mL）中 18–20 ℃ 保存，不超过 6 h。
- 选用色泽均匀（动物半球深棕/黑色，植物半球淡黄色）、表面无斑块的健康卵。
2.2 精子准备（体外授精时）
- 颈椎脱位法处死雄性爪蟾，取出双侧睾丸，置于含 1× MBS-H（无 Ca²⁺）的培养皿中。
- 精细镊子轻轻撕碎睾丸释放精子悬液；立即使用或于 4 ℃ 保存（不超过 2 h）。
3. 授精与早期胚胎培养
3.1 自然交配
按 hCG 诱导自然交配规程操作（参见人工诱导交配技术），受精率 ≥80% 为合格批次。
3.2 体外授精
- 将卵块铺于干燥培养皿，滴加 50–100 μL 精子悬液均匀覆盖卵表面，室温静置 5 min。
- 加入 1× MBS-H 启动授精，约 10–15 min 后可见受精卵旋转。
- 受精后 30–60 min 用 4% L-半胱氨酸（pH 7.8–8.0）去除卵胶膜，彻底清洗。
4. 孵化水质标准
| 水质参数 | 推荐值 |
|---|
| 温度 | 22–24 ℃ |
| pH | 6.5–7.5 |
| 总氨氮（TAN） | <0.1 mg/L |
| 亚硝酸盐 | <0.05 mg/L |
| 溶氧 | ≥7 mg/L |
| 换水量（非循环系统） | 每次 ≤25%，温差 ≤2 ℃ |
- 底质：煮沸灭菌硅化卵石（直径 2–3 cm），厚 1–2 cm，防止胚胎堆叠。
- 每日换水 1 次，及时清除白化死胚，防止水质恶化感染正常胚胎。
- NF37/38 期前（内源营养期）禁止投喂，胚胎完全依赖卵黄囊供能。
5. 蝌蚪分阶段饲养
| 发育阶段 | 特征 | 饲料类型 | 投喂频率 |
|---|
| NF38–NF45 | 开口期，开始活跃游动 | 螺旋藻悬液（2 g/50 mL） | 每日 1 次 |
| NF46–NF55 | 后肢萌出 | 螺旋藻悬液 | 每日 1–2 次 |
| NF56–NF63 | 前肢出现 | 碎颗粒饲料（2–3 mm） | 每日 1 次 |
| NF64–NF65 | 变态期（尾部收缩） | 停止投喂 | — |
| NF66+（幼蛙） | 变态完成 | 浮性颗粒 0.5 mm | 每周 3 次 |
- 以水清且底部出现绿色条状粪便作为投喂量适宜的判断依据；水浑浊则减量，粪便少则加量。
- 禁止同龄混养，防止大个体蚕食小个体。
6. 性成熟加速（可选）
- 适当升温至 22–25 ℃ 可缩短变态周期约 2–4 周（须在安全范围内操作）。
- 控制蝌蚪密度 ≤20 只/10 L，充足营养与适当竞争并存，促进匀速发育。
- 激素强化方案：使用含 17β-雌二醇（10 μg/g）的复合饲料凝胶，每日投喂 1 次，可将性成熟周期从正常的 12–15 个月缩短至 9–12 个月。
过度投喂可致肠梗阻（死亡率 >30%）；温度突变超过 3 ℃ 可造成大批死亡；幼蛙转入循环水系统前须分批换水过渡，减少应激。
参考文献References
- Nieuwkoop PD & Faber J (1994) Normal Table of Xenopus laevis (Daudin), 2nd edn. Garland Publishing, New York.
- Sive HL, Grainger RM, Harland RM (2000) Early Development of Xenopus laevis: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
- Wu M & Gerhart J (1991) Raising Xenopus in the laboratory. Methods Cell Biol 36:3–18.