实验技术Experimental protocols

爪蟾核心实验技术与操作规程,供科研人员参考。Core Xenopus protocols and SOPs for reference.

01
方法

爪蟾不同生活周期示意图(NF 1–40 期)Xenopus developmental stage chart (NF 1–40)

基于 Nieuwkoop–Faber 标准的高清彩色分期图,涵盖受精卵至自由游泳蝌蚪各阶段形态特征。High-resolution NF stage chart from fertilised egg to free-swimming tadpole, with key morphological features.

实验技术Protocol
02
方法

非洲爪蟾卵母细胞提取与分离Xenopus oocyte extraction and isolation

动物筛选、低温麻醉、手术取卵、OR2 保存液配方与胶原酶消化分离流程。Animal selection, cold anaesthesia, surgery, OR2 solution, and collagenase digestion protocol.

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03
方法

爪蟾卵母细胞的分离与培养Xenopus oocyte isolation and culture

ND96 培养液配方、胶原酶消化(1 mg/mL,22℃)、Dumont V–VI 期筛选与质控标准。ND96 medium, collagenase digestion (1 mg/mL, 22 ℃), Dumont V–VI selection and QC criteria.

实验技术Protocol
04
方法

爪蟾蝌蚪视顶盖单细胞电转染技术Single-cell electroporation in Xenopus tectum

SCE 原理、微电极制备、电脉冲参数(20 V, τ=70 ms)与故障排除。SCE principle, micropipette prep, pulse parameters and troubleshooting.

实验技术Protocol
05
方法

爪蟾蝌蚪全脑电转染方法Whole-brain electroporation in Xenopus tadpoles

脑室注射 75–125 nL 质粒 DNA、铂电极 30–50 V、单侧 / 双侧靶向转染。Ventricular injection 75–125 nL plasmid, Pt electrode 30–50 V, unilateral/bilateral targeting.

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06
方法

非洲爪蟾卵母细胞分期与选用(基于 Dumont 标准)Oocyte staging & selection (Dumont)

I–VI 期特征、直径与各类实验的选用建议。Stage I–VI features and selection for each assay.

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07
方法

爪蟾卵母细胞的 cRNA 微注射cRNA microinjection into oocytes

cRNA 准备、注射量、针径与功能检测。cRNA prep, dose, needle and functional readout.

实验技术Protocol
08
方法

爪蟾卵母细胞显微注射技术Oocyte microinjection technique

设备、针尖校准、注射位置与恢复培养。Equipment, calibration, site and recovery.

实验技术Protocol
09
方法

非洲爪蟾的注射规范操作Standard injection handling

徒手持握法、鱼网固定法与动物福利要点。Hand-holding, net restraint and welfare notes.

实验技术Protocol
10
方法

非洲爪蟾胚胎在脊椎动物早期发育中的研究方法Embryo methods in early development

显微操作、细胞追踪、移植与基因功能研究。Micromanipulation, tracing, grafting and gene function.

实验技术Protocol
11
方法

吗啉环寡聚核苷酸(Morpholino)的使用方法和步骤Morpholino oligo usage

原理、设计、用量、对照与脱靶验证。Principle, design, dose, controls and validation.

实验技术Protocol
12
方法

非洲爪蟾实验用缓冲液与麻醉剂配制Buffers & anesthetic preparation

Steinberg's、MBS-H、PBS 配方与 MS-222 麻醉。Steinberg's/MBS-H/PBS recipes and MS-222.

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13
方法

双电极电压钳(TEVC)操作规程Two-Electrode Voltage Clamp (TEVC) protocol

电极充填(3M KCl)、ND96 浴槽液配方、钳制步骤与常见问题排查。Electrode fill (3M KCl), ND96 bath solution, clamping procedure and troubleshooting.

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